主動(dòng)脈瘤的發(fā)病率在老年人群中可以高達(dá)5-10%，胸主動(dòng)脈瘤的患病率占主動(dòng)脈瘤的20.3%～37%。但是關(guān)于胸主動(dòng)脈瘤的動(dòng)物模型較少。在多種方法誘導(dǎo)的腹主動(dòng)脈瘤模型中，胸主動(dòng)脈瘤的發(fā)病率較低。

與CaCl2誘導(dǎo)的模型、脫細(xì)胞主動(dòng)脈移植模型、囊狀動(dòng)脈瘤動(dòng)物模型，AngII誘導(dǎo)等動(dòng)物模型相比，BAPN誘導(dǎo)的動(dòng)物模型的優(yōu)點(diǎn)如下：1）操作簡(jiǎn)單，不需要手術(shù)，使用的是3月齡C57BL/6J小鼠，而不是基因工程小鼠；2）相較于傳統(tǒng)的BAPN飲水，灌胃給藥方式更穩(wěn)定，給藥劑量更可控；3)成瘤率高，大約85%，成瘤部位主要集中在胸主。該法造模的特點(diǎn)：大體及超聲檢測(cè)能夠發(fā)現(xiàn)主動(dòng)脈直徑增厚超過(guò)50%；夾層瘤部冰凍切片HE 染色可見主動(dòng)脈擴(kuò)張現(xiàn)象嚴(yán)重，纖維化加劇，彈力纖維斷裂，將可進(jìn)一步應(yīng)用于胸主動(dòng)脈瘤疾病的手術(shù)和藥物研發(fā) 。

動(dòng)物模型制備過(guò)程中，由飼養(yǎng)人員進(jìn)行日常飼喂，由獸醫(yī)進(jìn)行監(jiān)督管理，造模期間動(dòng)物狀態(tài)良好，每天記錄病死只數(shù)，造模選用按動(dòng)物體重確定灌胃劑量，對(duì)動(dòng)物傷害小，每周稱重一次，未使用微生物，對(duì)環(huán)境沒(méi)有影響，造模方法簡(jiǎn)便易，行重復(fù)性好，不可遺傳。

1.大體結(jié)構(gòu)觀察胸主動(dòng)脈夾層瘤，超聲觀察夾層瘤直徑。

大體結(jié)構(gòu)顯示，BAPN給藥組胸主動(dòng)脈處有明顯的瘤狀突起。超聲結(jié)果顯示BAPN誘導(dǎo)胸主動(dòng)脈瘤組，給藥四周后，胸主動(dòng)脈直徑超過(guò)對(duì)照組直徑的50%，認(rèn)為造模成功。

2.夾層瘤冰凍切片HE染色

HE染色結(jié)果顯示，和對(duì)照組相比，BAPN誘導(dǎo)組小鼠胸主動(dòng)脈節(jié)段出現(xiàn)彈力纖維降解，細(xì)胞外基質(zhì)沉積和炎癥細(xì)胞增多的現(xiàn)象。

胸主動(dòng)脈瘤(aortic aneurysm) 常發(fā)生在升主動(dòng)脈主動(dòng)脈弓、胸部降主動(dòng)脈， 主動(dòng)脈壁局部或彌漫性的異常擴(kuò)張超過(guò)正常值 50%以上，壓迫周圍器官而引起癥狀。

小鼠胸主動(dòng)脈瘤模型：瘤體發(fā)生部位為胸主動(dòng)脈，主動(dòng)脈直徑擴(kuò)張程度，病理特征為炎細(xì)胞浸潤(rùn)，彈力纖維降解。

1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選擇健康雄性C57小鼠，3周齡，體質(zhì)量10-15g，均購(gòu)于北京華阜康華生物科技股份有限公司。飼養(yǎng)于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所動(dòng)物中心動(dòng)物房?jī)?nèi)，5只/盒屏障系統(tǒng)中，溫度( 22±2) ℃，濕度50%～60%，12 h 循環(huán)照明，小鼠自由攝取食、水，IACUC號(hào)：ILAS-YZW17007。

2 方法

2.1 動(dòng)物模型制備

BAPN用水溶解成50mg/ml的儲(chǔ)存液。C57BL/6J小鼠根據(jù)體重，按1g/kg/d的劑量進(jìn)行BAPN灌胃，4周，每周測(cè)量體重一次，根據(jù)體重變化，調(diào)整給藥量。

2.2 標(biāo)本采集及處理

完成灌胃四周后，稱體重，麻醉后腹主動(dòng)脈采血至死亡，室溫靜置2h后于4℃3000r離心10分鐘提取血清，-80℃冰箱凍存。取心臟、主動(dòng)脈做石蠟切片，10%中性福爾馬林中固定，30%蔗糖脫水，冰凍切片包埋劑包埋并切片；進(jìn)行免疫組化及免疫熒光檢測(cè)，其余血管組織液氮冷凍-80℃保存，提取蛋白進(jìn)行免疫印跡檢測(cè)。

一、疾病概述

主動(dòng)脈瘤(aortic aneurysm) 指主動(dòng)脈壁局部或彌漫性的異常擴(kuò)張超過(guò)正常值 50%以上，壓迫周圍器官而引起癥狀，常發(fā)生在升主動(dòng)脈主動(dòng)脈弓、胸部降主動(dòng)脈、胸腹主動(dòng)脈和腹主動(dòng)脈，其發(fā)病率在老年人群中可以高達(dá)5-10%，并呈上升趨勢(shì)。主動(dòng)脈瘤可由多種因素引起，如家族遺傳、高血壓、動(dòng)脈硬化等，其主要病理改變?yōu)檠鼙趶椓w維斷裂及平滑肌細(xì)胞病變和血管外膜膠原沉積。主動(dòng)脈瘤根據(jù)發(fā)病位置可分為胸主動(dòng)脈瘤和腹主動(dòng)脈瘤。胸主動(dòng)脈瘤發(fā)生在所有年齡段的人，沒(méi)有性別關(guān)聯(lián)，并且與遺傳因素高度相關(guān)。相反，腹主動(dòng)脈瘤的發(fā)生與年齡，性別，動(dòng)脈粥樣硬化和吸煙有關(guān)，但與遺傳關(guān)聯(lián)較弱。

約80%的胸主動(dòng)脈瘤是繼發(fā)于高血壓病動(dòng)脈粥樣硬化，14%是由于梅毒引起，其他的原因包括先天新因素、馬方綜合征及胸部頓挫傷。大多發(fā)生于60歲以后，男女之比為10：2。胸主動(dòng)脈瘤的患病率占主動(dòng)脈瘤的20.3%～37%。

本病發(fā)病緩慢，早期多無(wú)癥狀和體征，至后期由于動(dòng)脈瘤壓迫周圍組織而產(chǎn)生癥狀，其臨床表現(xiàn)由于動(dòng)脈瘤的大小、形狀、部位和生長(zhǎng)方向而有不同。胸主動(dòng)脈瘤的手術(shù)療法在時(shí)間的選擇上仍然受多種因素影響。目前也是以手術(shù)干預(yù)為主，沒(méi)有有效的藥理治療方法，構(gòu)建小鼠胸主動(dòng)脈瘤動(dòng)物模型為胸主動(dòng)脈瘤發(fā)病機(jī)制的研究和藥物評(píng)價(jià)研究提供支撐。

二、研究背景

1、造模因素信息

BAPN誘導(dǎo)小鼠胸主動(dòng)脈瘤模型

2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物背景信息

3周齡C57BL/6J小鼠

3、研究背景

該動(dòng)物模型的研究目的及意義；該動(dòng)物模型的國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展并附參考文獻(xiàn)。

主動(dòng)脈瘤動(dòng)物模型是研究人主動(dòng)脈瘤的重要工具，對(duì)闡釋主動(dòng)脈瘤的病理生理學(xué)機(jī)制、研發(fā)和評(píng)價(jià)主動(dòng)脈瘤的治療藥物都具有重要意義。當(dāng)前關(guān)于腹主動(dòng)脈瘤的動(dòng)物模型有很多，也比較成熟，但是關(guān)于胸主動(dòng)脈瘤的動(dòng)物模型較少。在多種方法誘導(dǎo)的腹主動(dòng)脈瘤模型中，雖有胸主動(dòng)脈瘤的發(fā)生，但胸主動(dòng)脈瘤的發(fā)病率較低。當(dāng)前應(yīng)用最廣泛的主動(dòng)脈瘤動(dòng)物模型包括彈性蛋白酶誘導(dǎo)的模型、CaCl2誘導(dǎo)的模型、脫細(xì)胞主動(dòng)脈移植模型、囊狀動(dòng)脈瘤動(dòng)物模型，AngII誘導(dǎo)的動(dòng)物模型、醛固酮受體激動(dòng)劑加高鹽誘導(dǎo)的動(dòng)物模型、基因編輯的動(dòng)脈瘤動(dòng)物模型 [1-6]。而β-氨基丙腈（BAPN）誘導(dǎo)的動(dòng)物模型則是最近幾年發(fā)現(xiàn)的一種新的誘導(dǎo)胸主動(dòng)脈瘤的方法[7]。 BAPN是賴氨酰氧化酶（Lox）的強(qiáng)大抑制劑，Lox是由血管平滑肌細(xì)胞釋放的一種酶，參與前膠原和原彈性蛋白的共價(jià)連接，產(chǎn)生不溶物原纖維[8]。Lox通過(guò)調(diào)控不溶性ECM在血管發(fā)育中起關(guān)鍵作用。小鼠中Lox基因組失活可導(dǎo)致動(dòng)脈瘤的形成[9-10]。該模型的優(yōu)點(diǎn)如下：1）操作簡(jiǎn)單，不需要手術(shù)，使用的是3月齡C57BL/6J小鼠，而不是基因工程小鼠；2）相較于傳統(tǒng)的BAPN飲水，灌胃給藥方式更穩(wěn)定，給藥劑量更可控；3)成瘤率高，大約85%，成瘤部位主要集中在胸主。

[1]Yue J, Yin L, Shen J, et al. A Modified Murine Abdominal Aortic Aneurysm Rupture Model Using Elastase Perfusion and Angiotensin II Infusion. Ann Vasc Surg. 2020;67:474-81.

[2]Gertz SD, Kurgan A, Eisenberg D. Aneurysm of the rabbit common carotid artery induced by periarterial application of calcium chloride in vivo. J Clin Invest. 1988;81(3):649-56.

[3]Liu S, Xie Z, Daugherty A, et al. Mineralocorticoid receptor agonists induce mouse aortic aneurysm formation and rupture in the presence of high salt. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2013;33(7):1568-79.

[4] Pereira, L., Andrikopoulos, K., Tian, J., LeeTargetting of the geneencoding fibrillin-1 recapitulates the vascular aspect of Marfan syndrome. Nat.Genet. 17, 218–222.

[5] Oshima M，Oshima H，Taketo MM．TGF．beta receptor type IIdeficiency results in defects of yolk sac hematopoiesis andvasculogenesis[J]．Dev Biol，1996，179(1)：297—302．

[6] Larsson J，Goumans MJ，Sjostrand LJ，et a1．Abnormalangiogenesis but intact hematopoietie potential in TGF—betatype I receptor—deficient mice[J]．EMBO J，2001，20(7)：1663—1673

[7]Ren W, Liu Y, Wang X, et al. beta-Aminopropionitrile monofumarate induces thoracic aortic dissection in C57BL/6 mice. Sci Rep. 2016;6:28149.

[8]Wagenseil JE, Mecham RP. New insights into elastic fiber assembly. Birth Defects Res C Embryo Today. 2007;81(4):229-40.

[9]Maki JM, Rasanen J, Tikkanen H, et al. Inactivation of the lysyl oxidase gene Lox leads to aortic aneurysms, cardiovascular dysfunction, and perinatal death in mice. Circulation. 2002;106(19):2503-9.

[10] Guo, D.-c., 2016. LOX mutations predispose to thoracic aortic aneurysms and dissectionsnovelty and significance. Circ. Res. 118, 928–934.)