病毒滅活試驗(yàn)是什么 科普病毒滅活試驗(yàn)的準(zhǔn)備工作
公司簡(jiǎn)介
健明迪檢測(cè)提供的病毒滅活試驗(yàn)是什么 科普病毒滅活試驗(yàn)的準(zhǔn)備工作，病毒是可引發(fā)疾病的微生物，比細(xì)菌小，由蛋白質(zhì)外殼、包膜和含有DNA或RNA的內(nèi)核構(gòu)成，病毒依靠活細(xì)胞實(shí)現(xiàn)自我復(fù)制。而宣稱(chēng)能消毒的各式空氣凈化器、消毒器械、消毒劑及具有抗病毒功效的口罩、紡織品等產(chǎn)品或材料，是否能夠達(dá)標(biāo)消毒或抗毒的標(biāo)準(zhǔn)，無(wú)一不需要經(jīng)過(guò)病毒滅活試驗(yàn)。本文特此探討健明迪檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室是如何進(jìn)行病毒滅活試驗(yàn)的。
病毒滅活試驗(yàn)的滴度計(jì)算方法
(1)終點(diǎn)稀釋法病毒感染滴度的計(jì)算
以半數(shù)細(xì)胞感染劑量(TCID50)表示。TCID50的對(duì)數(shù)值計(jì)算公式如下。
TCID50對(duì)數(shù)值=病變率高于50%組稀釋度的對(duì)數(shù)值＋距離比例
(2)噬斑法病毒感染滴度的計(jì)算
噬斑法病毒感染滴度，以噬斑形成單位數(shù)（ pfu)，簡(jiǎn)稱(chēng)噬斑數(shù)表示。計(jì)數(shù)方法同活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)技術(shù)。
每毫升測(cè)試樣品中的病毒含量計(jì)算（pfu/ml）=平板平均噬斑數(shù)×稀釋倍數(shù)
(3)平均滅活對(duì)數(shù)值的計(jì)算
平均滅活對(duì)數(shù)值按下式計(jì)算：設(shè)陽(yáng)性（病毒）對(duì)照組平均病毒感染滴度（TCID50或pfu）的為No，試驗(yàn)（消毒)組平均病毒感染滴度（TCI,50或pfu）為Nx。
平均滅活對(duì)數(shù)值= log No—log Nx
更多病毒殺滅試驗(yàn)的問(wèn)題可咨詢(xún)健明迪檢測(cè)。
病毒滅活試驗(yàn)的病毒懸液制備
(1)從液氮中取出凍存的試驗(yàn)用宿主細(xì)胞，在37℃溫水中迅速融化，用毛細(xì)吸管移植于含有細(xì)胞維持液的細(xì)胞管內(nèi)，吹吸數(shù)次，使混勻，立即離心(3000r/min，3min)，去上清液。再加入適當(dāng)?shù)募?xì)胞維持液，吹吸數(shù)次，使混勻，同上離心后，轉(zhuǎn)種于加有10ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中。逐日觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，在細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)單層時(shí)，用于消毒試驗(yàn)。
(2）取出低溫凍存的試驗(yàn)病毒毒種，37℃水浴融化，用細(xì)胞維持液作10倍稀釋?zhuān)缓蠼臃N于已經(jīng)長(zhǎng)滿(mǎn)單層細(xì)胞的細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，置37℃溫箱中，使與細(xì)胞吸附、生長(zhǎng)。逐日觀察病變，待3/4細(xì)胞出現(xiàn)病變時(shí)，收獲病毒。
(3）將含有病毒及宿主細(xì)胞的培養(yǎng)液，在冰浴條件下，用超聲波（或反復(fù)凍融）破碎宿主細(xì)胞，釋放病毒。然后，盡快離心(6000r/min，15min）去除沉淀（主要為細(xì)胞碎片)，上清液即為所需的病毒懸液。按每管1.Oml分裝于無(wú)菌離心管(1.5ml)中-
(4)取1支病毒懸液，按病毒滴度測(cè)定法，測(cè)定其病毒滴度。其余均冷凍保存于-80℃?zhèn)溆谩?br>
試驗(yàn)器材
(1)試驗(yàn)用病毒株：脊髓灰質(zhì)炎病毒1型(poliovirus-Ⅰ ,PV-Ⅰ)疫苗株；艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)美國(guó)株。
(2)宿主細(xì)胞：可采用VERO細(xì)胞系、BGM細(xì)胞、Hela細(xì)胞系或FL細(xì)胞系，作為PV-1的測(cè)試細(xì)胞。用含有人T淋巴細(xì)胞白血病病毒Ⅰ型( human T cell leukemiavirus 1，HTLV-1)基因的人淋巴細(xì)胞(MT4株)作為HIV-1的測(cè)試細(xì)胞。
(3)細(xì)胞培養(yǎng)瓶與96孔培養(yǎng)板。(4)恒溫水浴箱。
(5)二氧化碳培養(yǎng)箱。
(6)層流超凈工作臺(tái)。
(7)低溫冰箱(-20℃，-80℃)。
(8)液蠶罐。
(9)倒置顯微鏡。
(10)離心機(jī)。
(11)可調(diào)移液器及配套一次性塑料吸頭。
(12)細(xì)胞維持培養(yǎng)基。
(13)細(xì)胞完全培養(yǎng)基。
(14)去離子水。
病毒滅活試驗(yàn)的適用范圍
主要適用于消毒產(chǎn)品鑒定或日常監(jiān)測(cè)。用具有一定代表性的、活的病毒及其細(xì)胞感染技術(shù)，評(píng)價(jià)各種用途的消毒因子對(duì)測(cè)試病毒的殺滅效果。按此方法進(jìn)行的試驗(yàn)，只是對(duì)消毒因子的滅活病毒能力的重要方面進(jìn)行驗(yàn)證。
病毒滅活試驗(yàn)的 病毒是可引發(fā)疾病的微生物，比細(xì)菌小，由蛋白質(zhì)外殼、包膜和含有DNA或RNA的內(nèi)核構(gòu)成，病毒依靠活細(xì)胞實(shí)現(xiàn)自我復(fù)制。而宣稱(chēng)能消毒的各式空氣凈化器、消毒器械、消毒劑及具有抗病毒功效的口罩、紡織品等產(chǎn)品或材料，是否能夠達(dá)標(biāo)消毒或抗毒的標(biāo)準(zhǔn)，無(wú)一不需要經(jīng)過(guò)病毒滅活試驗(yàn)。本文特此探討健明迪檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室是如何進(jìn)行病毒滅活試驗(yàn)的。
(1)終點(diǎn)稀釋法病毒感染滴度的計(jì)算
以半數(shù)細(xì)胞感染劑量(TCID50)表示。TCID50的對(duì)數(shù)值計(jì)算公式如下。
TCID50對(duì)數(shù)值=病變率高于50%組稀釋度的對(duì)數(shù)值＋距離比例
(2)噬斑法病毒感染滴度的計(jì)算
噬斑法病毒感染滴度，以噬斑形成單位數(shù)（ pfu)，簡(jiǎn)稱(chēng)噬斑數(shù)表示。計(jì)數(shù)方法同活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)技術(shù)。
每毫升測(cè)試樣品中的病毒含量計(jì)算（pfu/ml）=平板平均噬斑數(shù)×稀釋倍數(shù)
(3)平均滅活對(duì)數(shù)值的計(jì)算
平均滅活對(duì)數(shù)值按下式計(jì)算：設(shè)陽(yáng)性（病毒）對(duì)照組平均病毒感染滴度（TCID50或pfu）的為No，試驗(yàn)（消毒)組平均病毒感染滴度（TCI,50或pfu）為Nx。
平均滅活對(duì)數(shù)值= log No—log Nx
更多病毒殺滅試驗(yàn)的問(wèn)題可咨詢(xún)健明迪檢測(cè)。
病毒滅活試驗(yàn)的病毒懸液制備
(1)從液氮中取出凍存的試驗(yàn)用宿主細(xì)胞，在37℃溫水中迅速融化，用毛細(xì)吸管移植于含有細(xì)胞維持液的細(xì)胞管內(nèi)，吹吸數(shù)次，使混勻，立即離心(3000r/min，3min)，去上清液。再加入適當(dāng)?shù)募?xì)胞維持液，吹吸數(shù)次，使混勻，同上離心后，轉(zhuǎn)種于加有10ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中。逐日觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，在細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)單層時(shí)，用于消毒試驗(yàn)。
(2）取出低溫凍存的試驗(yàn)病毒毒種，37℃水浴融化，用細(xì)胞維持液作10倍稀釋?zhuān)缓蠼臃N于已經(jīng)長(zhǎng)滿(mǎn)單層細(xì)胞的細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，置37℃溫箱中，使與細(xì)胞吸附、生長(zhǎng)。逐日觀察病變，待3/4細(xì)胞出現(xiàn)病變時(shí)，收獲病毒。
(3）將含有病毒及宿主細(xì)胞的培養(yǎng)液，在冰浴條件下，用超聲波（或反復(fù)凍融）破碎宿主細(xì)胞，釋放病毒。然后，盡快離心(6000r/min，15min）去除沉淀（主要為細(xì)胞碎片)，上清液即為所需的病毒懸液。按每管1.Oml分裝于無(wú)菌離心管(1.5ml)中-
(4)取1支病毒懸液，按病毒滴度測(cè)定法，測(cè)定其病毒滴度。其余均冷凍保存于-80℃?zhèn)溆谩?br>
試驗(yàn)器材
(1)試驗(yàn)用病毒株：脊髓灰質(zhì)炎病毒1型(poliovirus-Ⅰ ,PV-Ⅰ)疫苗株；艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)美國(guó)株。
(2)宿主細(xì)胞：可采用VERO細(xì)胞系、BGM細(xì)胞、Hela細(xì)胞系或FL細(xì)胞系，作為PV-1的測(cè)試細(xì)胞。用含有人T淋巴細(xì)胞白血病病毒Ⅰ型( human T cell leukemiavirus 1，HTLV-1)基因的人淋巴細(xì)胞(MT4株)作為HIV-1的測(cè)試細(xì)胞。
(3)細(xì)胞培養(yǎng)瓶與96孔培養(yǎng)板。(4)恒溫水浴箱。
(5)二氧化碳培養(yǎng)箱。
(6)層流超凈工作臺(tái)。
(7)低溫冰箱(-20℃，-80℃)。
(8)液蠶罐。
(9)倒置顯微鏡。
(10)離心機(jī)。
(11)可調(diào)移液器及配套一次性塑料吸頭。
(12)細(xì)胞維持培養(yǎng)基。
(13)細(xì)胞完全培養(yǎng)基。
(14)去離子水。
病毒滅活試驗(yàn)的適用范圍
主要適用于消毒產(chǎn)品鑒定或日常監(jiān)測(cè)。用具有一定代表性的、活的病毒及其細(xì)胞感染技術(shù)，評(píng)價(jià)各種用途的消毒因子對(duì)測(cè)試病毒的殺滅效果。按此方法進(jìn)行的試驗(yàn)，只是對(duì)消毒因子的滅活病毒能力的重要方面進(jìn)行驗(yàn)證。
病毒滅活試驗(yàn)的 病毒是可引發(fā)疾病的微生物，比細(xì)菌小，由蛋白質(zhì)外殼、包膜和含有DNA或RNA的內(nèi)核構(gòu)成，病毒依靠活細(xì)胞實(shí)現(xiàn)自我復(fù)制。而宣稱(chēng)能消毒的各式空氣凈化器、消毒器械、消毒劑及具有抗病毒功效的口罩、紡織品等產(chǎn)品或材料，是否能夠達(dá)標(biāo)消毒或抗毒的標(biāo)準(zhǔn)，無(wú)一不需要經(jīng)過(guò)病毒滅活試驗(yàn)。本文特此探討健明迪檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室是如何進(jìn)行病毒滅活試驗(yàn)的。
