采用OVA、LPS和煙熏共刺激方法建立的ACO小鼠模型可較好模擬ACO的臨床病理特征。

本實(shí)驗(yàn)采用昆明種6-8周齡的健康成年小鼠，體重均在33±2g，SPF級(jí)。飼料墊料均為高壓滅菌產(chǎn)品，購自北京斯貝福生物科技股份有限公司，動(dòng)物用水為實(shí)驗(yàn)室制UP水經(jīng)過除菌處理。飼養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)操作均于具有檢驗(yàn)合格資質(zhì)的SPF級(jí)屏障動(dòng)物室內(nèi)進(jìn)行，并且實(shí)驗(yàn)動(dòng)物以完整的包裝直接進(jìn)入屏障實(shí)驗(yàn)室，觀察室適應(yīng)7天后無異常情況，方可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。所有實(shí)驗(yàn)中小鼠均引頸處死，盡量減少動(dòng)物手術(shù)創(chuàng)傷程度及失血量。實(shí)驗(yàn)過程中動(dòng)物操作均符合動(dòng)物倫理學(xué)規(guī)范，對(duì)環(huán)境和生態(tài)影響等符合國家相關(guān)法律規(guī)定。

ACO小鼠表現(xiàn)出咳嗽，呼吸急促，喘息，分泌物增加，厭食，毛發(fā)褪色以及身體瘦小，這些癥狀都與臨床特征和病程相似。

HE染色檢測(cè)小鼠肺組織病理學(xué)變化，結(jié)果顯示，ACO組的組織病理學(xué)與COPD模型組相似，但是，浸潤由嗜酸性粒細(xì)胞組成并呈彌漫性病變。采用血細(xì)胞分類計(jì)數(shù)儀檢測(cè)肺泡灌洗液(BALF)中白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的變化，與對(duì)照組相比，ACO組小鼠的BALF中總白細(xì)胞，淋巴細(xì)胞，單核細(xì)胞，嗜中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞水平升高。Elisa法檢測(cè)BALF中炎性因子以及血清中IgE和IgG1水平的變化，ACO組的IL-4，IL-6，TNF-α，IFN-γ，IL-1β和IL-17A的水平較高，總IgE和IgG1水平顯著升高。

將Balb/C小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、asthma組、COPD組、ACO組。Asthma組于實(shí)驗(yàn)第0、7、14天腹腔注射OVA+100 μL氫氧化鋁凝膠致敏，第26-28天，連續(xù)三天氣管滴注OVA溶液進(jìn)行攻擊。COPD組于第15天和28天給予脂多糖(LPS)氣管滴注，第16-27和29-42天給與煙熏。ACO組和給藥組同時(shí)進(jìn)行asthma和COPD造模流程。對(duì)照組給予同等劑量的生理鹽水。未次熏煙24小時(shí)后，麻醉處死動(dòng)物并取材。

哮喘-慢性阻塞性肺疾病重疊（asthma-COPDoverlap，ACO），是一種同時(shí)具有哮喘和COPD特點(diǎn)的臨床綜合征，用以描述同時(shí)具有這兩種疾病特點(diǎn)的患者。2017年GINA報(bào)道，在多項(xiàng)流行病學(xué)研究中，由于定義和診斷方法的不同，納入對(duì)象的性別和年齡也有所不同，ACO的患病率介于15％～55％之間。ACO的患病率隨著年齡的增長而增加，在哮喘和COPD患者中，50歲以下的患病率<10％，而80歲以上患病率> 50％。

ACO的臨床表現(xiàn)與哮喘和COPD相似，主要癥狀為慢性咳嗽、喘息和活動(dòng)后氣促。除此之外，ACO患者比單純COPD患者更易患有其他合并癥，例如過敏性鼻炎、焦慮、胃食管返流疾病和骨質(zhì)疏松癥等，患心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)也更高。目前關(guān)于ACO的發(fā)病機(jī)制仍存在爭(zhēng)議，其潛在發(fā)病機(jī)制可能與兩種提出已久的假設(shè)有關(guān)。一種是"荷蘭假說"，認(rèn)為哮喘和COPD是同一疾病過程的兩種不同疾病實(shí)體。

GINA雖未給出明確的ACO診斷標(biāo)準(zhǔn)，但對(duì)于哮喘、COPD和ACO的鑒別和診斷提出了一個(gè)包含五個(gè)步驟的診斷方法。第一步：確定患者是否患有慢性氣道疾病；第二步：確定患者是否符合哮喘、COPD和ACO的初步臨床診斷；第三步：肺功能檢測(cè)；第四步：開始初始治療；第五步：轉(zhuǎn)診進(jìn)行性檢查。同臨床表現(xiàn)；另一種是"英國假說"，認(rèn)為哮喘和COPD是發(fā)病機(jī)制不同的兩種不同疾病實(shí)體。

1、造模因素信息

OVA：Sigma

Al2(SO4)3﹒18H2O：上海美化化工股份有限公司。

NaOH：北京化工廠。

LPS：Sigma公司產(chǎn)品

大前門香煙：上海煙草集團(tuán)有限責(zé)任公司。

2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物背景信息

Balb/C小鼠，雄性，SPF級(jí)，16-18g。

3、研究背景

目前ACO動(dòng)物模型尚未完全建立，治療藥物評(píng)估仍在起步階段。因此，本研究旨在建立符合疾病臨床特征的ACO小鼠模型，這項(xiàng)工作在未來將有助于對(duì)ACO的進(jìn)一步研究和臨床治療。