動物癥狀觀察：

表現(xiàn)為體重減輕、弓背豎毛，在回輸后的一個(gè)月后死亡。

實(shí)驗(yàn)中涉及動物的操作程序已經(jīng)得到中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物研究所實(shí)驗(yàn)動物使用與管理委員會的批準(zhǔn)(ILAS-GC-2012-001)。

1.模型評價(jià)

1.1 行為學(xué)：

1）精準(zhǔn)上肢運(yùn)動測試

前期訓(xùn)練：實(shí)驗(yàn)者首先使動物消除恐懼心理，誘導(dǎo)動物能從實(shí)驗(yàn)者手中抓取水果塊。與動物建立感情后，掛上實(shí)驗(yàn)裝置，將水果塊置于食槽中央。逐步引導(dǎo)動物從投食處取食。

每天上、下午固定時(shí)間各進(jìn)行一次。訓(xùn)練期間每日喂食改為一次，每次30g，訓(xùn)練結(jié)束后給與。保證飲水。訓(xùn)練期間監(jiān)控動物體重，根據(jù)體重調(diào)整喂食量。

數(shù)據(jù)采集：所有動物從實(shí)驗(yàn)裝置中的采食狀況穩(wěn)定后進(jìn)行本底數(shù)據(jù)采集。方法：將蘋果切成2×2×2cm大小的正方形塊，擺放在食槽中央，每次5塊。用秒表記錄動物將5塊水果全部取走的時(shí)間。每次數(shù)據(jù)的采集在一天內(nèi)完成，共5次，每次間隔2h。每次采集時(shí)，水果塊的大小、形狀及擺放位置要一致。造模后1d，3d，1w，2w，3w，4w采集實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，方法和采集時(shí)間與本底數(shù)據(jù)的采集相同。比較造模前后動物左上肢抓取水果塊的時(shí)間，評價(jià)造模效果。

2）神經(jīng)功能評分：造模后1d，3d，1w，2w，3w，4w使用經(jīng)過修改、細(xì)化的Kito靈長類動物神經(jīng)功能損害評分表對模型動物進(jìn)行神經(jīng)功能評分，其中意識28分，感覺系統(tǒng)22分，運(yùn)動系統(tǒng)32分，骨骼肌共濟(jì)協(xié)調(diào)18分共100分。

結(jié)果：動物在麻醉蘇醒后均出現(xiàn)了與梗死部位相對應(yīng)的神經(jīng)系統(tǒng)定位體征。主要表現(xiàn)為動物蘇醒后6h內(nèi)表現(xiàn)為有意識但情緒低落，對疼痛和聲音刺激不反抗。骨骼肌出現(xiàn)共濟(jì)失調(diào)。左前肢出現(xiàn)明顯的麻痹，不能抓握。術(shù)后3d部分動物的抓握能力有所恢復(fù)，但在采集數(shù)據(jù)的各個(gè)時(shí)間點(diǎn)，動物左上肢抓取水果塊的時(shí)間上均存在極顯著性差異。

1.2 影像學(xué)檢查：

1）頭顱MRI掃描：造模后24h，以后每2w一次進(jìn)行MRI檢查，觀察血腫及周圍的水腫、血腫情況；儀器型號：Philips Intera Achiva 3.0T磁共振儀，8道頭部線圈。方法：將動物麻醉后固定于免磁的頭架上，放入頭部線圈內(nèi)。T1掃描序列為IR，視野：120mm,TR/TE:2153ms/13/ms,層厚/間隔：3mm/0.3mm，矩陣256X256。

2）18F－FDG-PET頭顱掃描：儀器：SiemensECAT EXACT HR+ 型高分辨PET儀（32環(huán)BGO晶體，空間分辨率5mm）。造模后24小時(shí)，以后每2周一次進(jìn)行PET掃描。方法：動物麻醉后從股靜脈注入 37-47MBq（1.0-1.3mCi）的 18F—FDG，30min后行PET檢查，采用3D采集模式，掃描時(shí)間10min。觀察梗死周圍能量代謝情況。

結(jié)果：MRI檢查結(jié)果可見在手術(shù)相應(yīng)區(qū)域出現(xiàn)明顯缺損，缺損面積隨時(shí)間的推移減小。PET結(jié)果顯示右側(cè)大腦皮層梗死區(qū)代謝明顯減低。（圖3）

1.3 組織病理學(xué)檢查：造模后12h、6w、12w后分別處死動物1只、3只、3只動物，取腦組織進(jìn)行固定、切片，通過H.E染色、免疫組織化學(xué)染色方法觀察梗死灶周圍的病理學(xué)改變。使用AperioGL 系統(tǒng)對切片進(jìn)行掃描和分析。

結(jié)果：大體觀察：術(shù)后12h雙側(cè)大腦水腫，手術(shù)側(cè)較未手術(shù)側(cè)嚴(yán)重。右側(cè)大腦手術(shù)區(qū)域可見明顯梗死灶。6w、12w未見明顯水腫，仍可見明顯梗死灶。鏡下：術(shù)后12 h：腦膜血管擴(kuò)張充血。軟腦膜下出血。局部腦組織（皮質(zhì)）水腫，神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量減少，可見神經(jīng)細(xì)胞變性壞死，毛細(xì)血管擴(kuò)張充血。缺血灶最寬處面積達(dá)面積11.570mm × 3.687 mm。可見紅染無結(jié)構(gòu)物質(zhì)嵌入大腦皮層。術(shù)后6w：腦膜血管擴(kuò)張充血，局部內(nèi)皮細(xì)胞脫落。軟腦膜水腫。軟腦膜下大腦皮質(zhì)小灶性壞死，泡沫細(xì)胞浸潤。壞死區(qū)面積3.186mm × 6.057 mm。壞死灶周圍腦組織水腫，神經(jīng)細(xì)胞變性壞死。術(shù)后12w：腦膜血管擴(kuò)張充血，軟腦膜下少量出血。局部大腦皮質(zhì)輕度水腫。壞死區(qū)面積2.576mm × 5.377mm。

A 造模后12 h，腦組織水腫，可見明顯梗死灶

B造模后12 h，梗死灶面積達(dá)3.687mm×11.57mm。

C造模后12 h，腦組織內(nèi)毛細(xì)血管擴(kuò)張充血，大腦皮質(zhì)局部水腫（HE×200）

D造模后12 h，神經(jīng)細(xì)胞變性壞死（HE ×400）

E造模后6w，未見明顯水腫，可見明顯梗死灶

F造模后6w，梗死灶面積3.186 mm × 6.057 mm

G造模后6w，腦組織壞死，泡沫細(xì)胞浸潤（HE× 100）

H造模后6w，腦組織壞死區(qū)毛細(xì)血管內(nèi)黃色結(jié)晶，泡沫細(xì)胞浸潤（HE×200）

I造模后12w，未見明顯水腫，可見明顯梗死灶

J造模后12w，梗死灶面積2.576 mm × 5.377mm

K造模后12w，腦組織壞死，泡沫細(xì)胞浸潤, 壞死區(qū)毛細(xì)血管內(nèi)黃色結(jié)晶（HE× 100）

L造模后12w，神經(jīng)細(xì)胞變性壞死（HE ×400）

1、模型制作

1.1術(shù)前準(zhǔn)備：手術(shù)前12h禁食，6h禁水。氯胺酮15mg/kg對動物進(jìn)行麻醉，當(dāng)動物出現(xiàn)呼吸淺慢、角膜反射遲鈍，為麻醉適度表現(xiàn)。

1.2制作局部腦缺血模型：麻醉后的動物采用俯臥位固定在立體定位儀上，顱頂區(qū)備皮，常規(guī)消毒手術(shù)區(qū)皮膚，沿矢狀面在顱頂正中切開長約4 ～ 5 cm的切口，逐層分離皮下組織、帽裝肌腱、肌肉、骨膜，用擴(kuò)張器充分暴露手術(shù)視野。使用便攜式顱鉆在頂骨裂處進(jìn)行顱骨鉆孔，以鉆透顱骨，達(dá)硬腦膜為止（有落空感）。鉆好的孔為橢圓形，大小為3.0 cm × 1.5 cm，其長軸與顱骨正中線垂直。將冷光源發(fā)生器的發(fā)光口固定于顱頂開口處。周圍用浸透生理鹽水的無菌紗布覆蓋傷口。用鋁箔紙遮蓋動物眼睛，避免光化學(xué)反應(yīng)對動物視網(wǎng)膜的損害。靜脈注射玫瑰紅B35 mg/kg，從注射完畢開始計(jì)時(shí)，10 min后打開光源，電子光強(qiáng)選擇6，機(jī)械光強(qiáng)選擇C，照射10 min。第一次注射后5 min第二次注射玫瑰紅B，濃度與第一次相同。第一點(diǎn)照射完畢后，向顳側(cè)移動光源發(fā)光口，在第二點(diǎn)照射10 min。照射完畢，移去光源。縫合骨膜、皮膚。 肌肉注射青霉素40萬U預(yù)防感染。

一、疾病名稱

缺血性腦卒中（Cerebralischemic stroke）

二、缺血性腦卒中簡介

缺血性腦卒中是指由于腦的供血動脈（頸動脈和椎動脈）狹窄或閉塞、腦供血不足導(dǎo)致的腦組織壞死的總稱。

病因：血管缺血性損傷是由于各種原因誘發(fā)腦血管栓塞引起腦組織缺血、缺氧，進(jìn)一步誘發(fā)腦神經(jīng)細(xì)胞變性、壞死，最終導(dǎo)致神經(jīng)功能障礙、喪失。從缺血的影響范圍可將腦缺血分為局限性腦缺血和彌漫性腦缺血。局限性腦缺血的病因有：大腦中動脈栓塞；顱外頸內(nèi)動脈或椎動脈狹窄、閉塞或血栓形成；腦動脈痙攣。彌漫性腦缺血的病因有：心搏驟停、低血壓、貧血、低血糖等。

臨床癥狀：突發(fā)的對側(cè)肢體麻木、力弱、感覺障礙、單眼黑矇、眩暈、復(fù)視、雙眼黑矇、共濟(jì)障礙等。

治療：根據(jù)分期分型對癥治療。發(fā)作頻繁者，近期內(nèi)發(fā)生腦梗塞的可能性很大，應(yīng)積極治療，防止發(fā)生腦梗塞。積極治療危險(xiǎn)因素如高血壓、高血脂、心臟病、糖尿病、腦動脈硬化；預(yù)防性服用抗血小板積聚藥物；改善腦循環(huán)。